单细胞悬液质量直接决定细胞活率检测与流式细胞术结果的可靠性。脾脏细胞密度高、血细胞与结缔组织混杂，手工研磨容易损伤细胞并引入碎片，影响后续的判断。为提升样本前处理制备的一致性与效率，上海复旦大学平台引入了上海净信单细胞悬液制备仪JX-DLDXB-4，以小鼠脾脏为对象开展验证了实验测试，通过标准化酶解、终止、过滤与离心流程，探索兼顾细胞得率、活率和重复性的制备方案。

　　实验目的：本实验旨在验证上海净信单细胞悬液制备仪JX-DLDXB-4，将小鼠脾脏组织高效、温和地解离为成分均一的单细胞悬液，尽可能地保留细胞膜完整性，减少组织团块与碎片残留；随后结合细胞活率检测和流式染色，评估处理后的细胞得率、活率与可上机性，验证该仪器在脾脏等免疫器官样本制备中的稳定性与重复性，为代谢、肿瘤及表观遗传等方向的相关实验建立标准化前处理流程。

　　实验选用设备：上海净信单细胞悬液制备仪JX-DLDXB-4

　　单细胞制备仪对样品悬液制备的应用优势：

　　1. 程序标准化：内置脾脏专属程序，酶解时间、温度与处理强度可控，降低人为差异，批间重复性更好。

　　2. 温和高效：约25min完成解离，减少机械损伤，有利于维持较高细胞活率。

　　3. 杂质控制好：配合终止液、滤网及离心，可有效去除团块、碎片和红细胞背景。

　　4. 样本适配性强：适合脾脏等高细胞密度组织，所得悬液分散均匀，满足计数与流式染色需求。

　　单细胞悬液制备仪对小鼠脾脏细胞悬液制备的实验操作：

　　1. 仪器预热，酶在低温保存，提前取出化冻。

　　2. 杀鼠，取小鼠脾脏组织。

　　3. pbs冲洗三次。

　　4. 加入消化管中，尽量剪碎，加酶，选择脾脏程序，运行程序，25分钟时结束。

　　5. 转入离心管中，加按比例加终止液。

　　6. 50mL离心管加滤网过滤（40～70微米）。

　　7. 开启离心，离心后，沉淀用预冷PBS重悬，再去洗涤1遍，后续染色上流式。

　　实验操作注意事项：

　　1. 尽可能将组织块剪成小米粒大小，消化更充分。

　　2. 如果是细胞计数仪检测，建议使用去碎片剂，因为细胞计数仪会把碎片也记录为死细胞，导致细胞活率结果不准确。

　　单细胞悬液制备仪对小鼠脾脏样品制备前后效果对比图：

　　从实验前后对比图可见，经过上海净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪脾脏程序处理后，原本致密的小鼠脾脏组织被充分解离为均一、透亮的单细胞悬液；镜下及后续上样背景较干净，细胞分散良好，少见明显团块与组织碎片，满足染色和流式上机要求。按照实验操作的注意事项将组织剪至小米粒大小、并在计数时配合去碎片剂，可减少碎片被误判为死细胞的情况，使活率结果更接近真实水平。整体实验表明，该流程可在短时间内稳定获得质量合格的小鼠脾脏单细胞悬液。