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单细胞分离仪的应用,是怎样将单细胞悬液分离
行业新闻 2021-03-26 16:09

  单细胞的分离是单细胞测序领域的一个新尝试,利用单细胞分离仪的应用来筛选目的B细胞并进行测序,为发现新的抗体药物迈出了重要的一步。

  单细胞分离仪

  作为全基因组测序的一种方法,单细胞RNA测序被广泛地应用于单细胞水平面上来识别细胞的类型和变异状况。利用细胞标记CD27和细胞活性染料的单细胞分离设备,能够分离出单个活性的B细胞,从而对分离的单细胞基因状况进行分析表达,并与静息记忆的B细胞进行比较,可在单细胞水平研究基因表达上发现差异化。


  在mCD40L-3T3中批量刺激人的幼稚记忆B细胞培养6天。采集CD27-PE和CellTrackerGreen对细胞进行染色。对PE/FITC双阳性细胞的筛选应用单细胞分离仪,单细胞可被分选至96孔聚合酶链反应板内,在进行分离之前,4ul/孔裂解物被预先放置在聚合酶链式反应板上,经cDNA合成分析,其中百分之97为单细胞分离。


  其次,通过扩大VH和VL抗体的变化区域的特异性基因或全转录组文库制备的第二代测序获得序列,参照静息记忆b细胞BCR抗体表现资料组进行比较分析b细胞激活基因的差异c每个孔只有一套BCR转录本,而通过测序分析确定VH和VL抗体的质量充分表明只有一个细胞被分入了PCR管。

  样本的测序分离

  综上所述,被分离出的单细胞的效率同时也证实了经过预处理和设门标准所获取的B细胞是活性的。


  此外,分离出的单细胞cDNA还可应用于随后的单细胞转录组文库制备和其免疫球蛋白轻重链可变区域的完整PCR。单细胞分离仪还提供了一个全新的桌面型单细胞分离平台,能够与下游的单细胞测序分析试验进行无缝对接。


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