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微流控Drop-seq技术对单细胞的高通量微液滴测序
行业新闻 2021-06-29 16:12

  单细胞的高通量微液滴测序Drop-seq技术是可分析数千个单细胞的快速应用方法,可将各细胞包裹在纳升级微滴中,进行RNA杂交生成mRNA转录物,进行后续的测序分析。


  液滴微流控Drop-Seq技术的应用可将细胞悬浮液与带有分子条形码的微珠悬浮液泵汇合并形成层流,再与油相汇合形成单层流,然后再通过与油液相融合形成单分散的微滴,包裹住细胞和小球,完成核糖核酸的杂交,分解微滴,释放核糖核酸杂交物,制备细胞基因表达谱,进一步分析mRNA逆转录的来源。


  微流控Drop-Seq


单细胞高通量微液滴测序的操作方法:


  1.准备样品:从组织中分离细胞,制备细胞浮游液的分子条形码的微珠浮游液。


  2.制备微滴:将细胞浮游液和微珠浮游液泵送到芯片上,与油聚集形成单分散的微滴,将各细胞和微珠一起包裹在同一微滴中进行测序。


  3.细胞RNA的杂交:裂解微滴内的细胞,会释放出其mRNA,并与其分子条形码进行杂交。


  4.分子细胞的逆转录:分解微滴,释放mRNA的杂交,开始逆转录,形成mRNA的逆转录STAMPS。


  5.PCR的扩张:在核酸外切酶的作用下,将各mRNA的逆转录像物切断,用PCR扩张核酸,扩大其基因信息。


  6.序列分析:使用各种生物信息工具对其进行序列分析测序。


  单细胞高通量液滴测序


  液滴微流控制程序可通过快速分离微小体积样品,从而实现对数千个细胞的平行高通量分析,通常每秒可以产生1000个微滴,每个微粒的体积只有1nL,降低了实验成本。


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