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单细胞悬液制备的方法讲述
技术文章 2020-10-20 15:17

  当实体组织被分散成单细胞时,分离方法可能会对细胞的性质产生瞬时或持续的影响,例如,表面可见的细胞膜损伤,细胞表面会出现泡状现象,以及线粒体活性很难观察到的变化,蛋白质的丢失等等状况,而细胞的损伤则受许多因素的影响,比如温度,pH,处理时间等等。那对单细胞悬液制备方法有哪些?


单细胞组织


  酶消化法是实体组织向单细胞分散的主要方法之一。常见的酶有:链霉蛋白酶,胃蛋白酶,中性蛋白酶,胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,溶菌酶,弹性蛋白酶等,所使用的酶可以根据分散的组织类型进行确定。 但需注意其使用条件和影响因素,胃蛋白酶在碱性环境下会失去活性,胰蛋白酶在中性溶液中活性会缺失等。


  酶的原理有三个主要的方面:破坏组织间的胶原纤维,弹性纤维等,水解组织细胞与结构紧密结合的蛋白,水解粘多糖的组织细胞。


单细胞悬液制备方法


细胞组织在酶消化法下的操作:


  1、在离心管中放置适合进行酶消化的组织。


  2、向含有消化组织的试管中加入1~2ml选定的酶溶液。


  3、在恒温37摄氏度的环境中常规消化20~30min,间歇振荡或吹气消化。


  4、收集细胞悬浮物,用尼龙网过滤,去除细胞,低速离心去除细胞碎片。


  5、加入2ml的pbs搅拌均匀,离心丢弃并清除。然后再加入0.5毫升的PBS使细胞重悬。


  6、荧光标记后,制备好的单细胞悬液将被检测或储存以备后用。


  其实对于单细胞悬液制备方法还有很多,今天小编给你们列举的只是其中之一。你还知道哪些有关于单细胞进行悬液制备的方法呢,不如在评论中来给我们一起分享啊。


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